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A型口蹄疫抗體檢測試劑盒使用說明書

提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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詳細(xì)介紹

A型口蹄疫抗體檢測試劑盒

使用說明書

介紹

A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗體檢測試劑盒可用于檢測豬、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗體,用于評(píng)估A型口蹄疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的FMD病毒抗原。在試驗(yàn)中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有FMD病毒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶結(jié)合物,與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

組份

1

抗原預(yù)包被板條

1/2塊

7

陰性對(duì)照

0.8/1.6ml

2

酶結(jié)合物

11/22ml

8

陽性對(duì)照

0.8/1.6ml

3

10倍濃縮洗滌液

50/100ml

9

血清稀釋板

1/2塊

4

顯色液

11/22ml

10

封板膜

2/4張

5

樣本稀釋液

50/100ml

11

說明書

1份

6

終止液

6/11ml

 

 

 

 

需自備的設(shè)備及試劑

微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

一次性移液器吸頭。量筒:500ml。96孔板酶標(biāo)儀。蒸餾水或去離子水。洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1:100的體積比稀釋待檢血清。

注意:陰性和陽性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。

注意事項(xiàng)

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8℃。

不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。

所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得zui好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

血清稀釋板為一次性用品,不得重復(fù)使用;血清稀釋板的大容量為300μl/孔。

【操作步驟】

取預(yù)包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各2孔,取陰性及陽性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。

蓋上封板膜(可按實(shí)際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘。

小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)4-6次,后在干凈吸水紙上拍干。

每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同3。切記zui后在干凈吸水紙上拍干。

每孔加顯色液100µl,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是

陰性對(duì)照(N)OD值<0.20,同時(shí)陽性對(duì)照(P)OD值>0.3。

計(jì)算方法:

(樣品OD值-陰性O(shè)D均值)÷(陽性對(duì)照OD均值-陰性O(shè)D均值)=  IRPC值

陰陽性判斷:

IRPC<0.4判為陰性;0.4IRPC<0.45判為可疑;IRPC0.45則判斷為陽性。

有效期

貯存方法: 2 - 8ºC下貯存有效期 12個(gè)月。 

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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