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血鈣濃度檢測(cè)試劑盒說明書

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血鈣濃度檢測(cè)試劑盒說明書

微量法

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

血鈣幾乎全部存在于血漿中,所以血鈣主要指血漿鈣。血漿鈣有離子鈣和結(jié)合鈣兩種形式,

其中只有離子鈣直接起生理作用,它與結(jié)合鈣處于動(dòng)態(tài)平衡,并受血液 pH 的影響。血鈣水

平與多種重要的生理功能相關(guān),過高或過低都會(huì)影響正常生理功能。本試劑盒用于檢測(cè)血液

中游離鈣濃度。

測(cè)定原理:

在強(qiáng)堿溶液中游離鈣與 GBHA 反應(yīng)生成紅色鈣-GBHA 復(fù)合物,在 520nm 有吸收峰;通過測(cè)定 520nm 吸光度,計(jì)算游離鈣濃度。

自備儀器和用品:

可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、石英比色皿/96 孔板、無水甲醇、丙酮和蒸餾水。

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體×1 瓶(空瓶,試劑自備)。取10 mL試劑瓶。依次加入9 mL無水甲醇和1mL丙酮,蓋緊混勻即可。

標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1 瓶,3μmol/mL,4℃保存。

血鈣濃度測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到520nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管:取石英比色皿/96孔板,依次加入蒸餾水12μL,試劑一50μL,混勻;再加入試劑二50μL,混勻;zui后加入試劑三100μL,混勻;靜置5min后于520nm測(cè)定吸光度A空白管。做一個(gè)空白管即可。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取石英比色皿/96孔板,依次加入標(biāo)準(zhǔn)液12μL,試劑一50μL,混勻;再加入試劑二50μL,混勻;zui后加入試劑三100μL,混勻;靜置5min后于520nm測(cè)定吸光度A標(biāo)準(zhǔn)管。做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管即可。

4. 測(cè)定管:取石英比色皿/96孔板,依次加入血液樣品12μL,試劑一50μL,混勻;再加入試劑二50μL,混勻;zui后加入試劑三100μL,混勻;靜置5min后于520nm測(cè)定吸光度A測(cè)定管。記為 A 測(cè)定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次做三次重復(fù)。

血鈣濃度計(jì)算公式:

血鈣含量(μmol/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V 樣品總=3×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)液:3μmol/mL; V 樣總:樣品總體積,1 dL=100 mL。

 

 

注意事項(xiàng):

1. 宜早晨空腹采血,并且采血后應(yīng)該盡快完成測(cè)定。

2. 靜置 5 分鐘后立即測(cè)定。

3. 加試劑三后,應(yīng)該在 30 min 內(nèi)完成該管的測(cè)定。

4. zui低檢出限為0.1μmol/mL。

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