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產(chǎn)品展示Products
NF-KB p65活性檢測實驗
NF-KB p65活性檢測實驗
更新時間:2025-02-05
訪問量: 2412
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

提供商:上海研謹生物/杭州研謹生物
服務(wù)名稱:NF-KB p65活性檢測實驗
規(guī)格:實驗服務(wù)
價格: 200元
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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NF-KB p65活性檢測實驗產(chǎn)品概述:

NF-KB p65活性檢測實驗



核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控多種與炎癥、抗凋亡、

腫瘤形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)的基因表達。NF- kappaB (NF _kB)初被鑒定為在B細胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強子結(jié)合。但隨后在非B-細胞的細胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn),形成NF-KB和kB的復(fù)合物。初在DNA結(jié)合蛋白復(fù)臺物中分離的NF -kB是由p65(ReIA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68,p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結(jié)合活力,但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體,類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細胞質(zhì)中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。


IkB和p65單體結(jié)合,阻制了細胞核中的定位和DNA的結(jié)合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體,能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應(yīng) 。p49和p50也能形 成同源雙聚體,但在細胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實驗時,在20ul的反應(yīng)體積中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油,0.05%NP-40。當用純化的蛋白時,250-300ng足以形成凝膠遷移復(fù)合物, 而需用10ug的Hel a細胞核抽提物。凝膠遷移復(fù)合物在室溫中保溫30分鐘,在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復(fù)合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍色素的加樣溶液只能加入到陰性對照反應(yīng)中,因這兩種色素會加劇NF-kB復(fù)合物的解離。當用Hel a細胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來源時,可形成兩種序列特異的凝膠遷移復(fù)合物,即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達p49,p50, p65的細胞中, 可檢測到4個序例特異的凝膠遷移復(fù)合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高濃度的p65,可檢測到微量的p65/p65.


下列試劑可加強NF- kB在體外的結(jié)合: mM的GTP, ATP, 精胺,亞精胺,鋇或鈣離子,ng的

Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細胞核蛋白,利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細胞核蛋白并加以區(qū)分,通過酶標儀450nm處測定核蛋白標準品與NF -Kb p65吸光度值,進行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。

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